3.1.1在工作臺(tái)上進(jìn)行，涂布棒在每次使用之前應(yīng)用酒精棉擦拭并用酒精燈灼燒，冷卻后使用。 3.1.2制備后的土壤或沉積物稀釋液進(jìn)行培養(yǎng)皿接種，每個(gè)稀釋度樣品接種兩個(gè)培養(yǎng)皿。 3.1.3用移液器吸取100μL相應(yīng)稀釋度的土壤或沉積物稀釋液，注到培養(yǎng)皿中瓊脂培養(yǎng)基上，用涂布 棒涂勻。 3.1.4取另一組培養(yǎng)皿不接種土壤或沉積物稀釋液，接種無菌生理鹽水，作為空白對(duì)照， 8.1.5對(duì)培養(yǎng)皿進(jìn)行編號(hào)，記錄樣號(hào)、接種濃度、培養(yǎng)菌種，

3.2.1涂布接種完成后，將培養(yǎng)皿水平靜置30min，之后將其倒置于充有甲烷或丁烷氣體的 箱中，30℃恒溫培養(yǎng)5d～7d，直至菌落數(shù)量穩(wěn)定。 8.2.2MOB培養(yǎng)箱中甲烷濃度保持在10%左右，BOB培養(yǎng)箱中丁烷濃度保持在10%左右

2.1涂布接種完成后，將培養(yǎng)皿水平靜置30min，之后將其倒置于充有甲烷或丁烷氣體的密閉培 中，30℃恒溫培養(yǎng)5d～7d，直至菌落數(shù)量穩(wěn)定。 2.2MOB培養(yǎng)箱中甲烷濃度保持在10%左右，BOB培養(yǎng)箱中丁烷濃度保持在10%左右

8.3.1菌落培養(yǎng)結(jié)束后，統(tǒng)計(jì)每個(gè)培養(yǎng)皿上的菌落數(shù)。如果不能立即計(jì)數(shù)，應(yīng)將培養(yǎng)皿存放于4℃冷 藏箱，且不應(yīng)超過24h。 3.3.2進(jìn)行培養(yǎng)血菌落計(jì)數(shù)時(shí)，直接采用菌落計(jì)數(shù)器進(jìn)行計(jì)數(shù)。對(duì)所有稀釋度樣品進(jìn)行計(jì)數(shù)，選擇菌 落數(shù)在30～300個(gè)的稀釋度樣品進(jìn)行菌落計(jì)算。 3.3.3在記下各培養(yǎng)皿的菌落數(shù)后，求出該稀釋度下的培養(yǎng)皿平均菌落數(shù)。 8.3.4菌落數(shù)量按公式（2）、公式（3）計(jì)算

如果不能立么愈計(jì)數(shù)，特培養(yǎng)量存放于4 箱家具標(biāo)準(zhǔn)，且不應(yīng)超過24h。 3.2進(jìn)行培養(yǎng)血菌落計(jì)數(shù)時(shí)，直接采用菌落計(jì)數(shù)器進(jìn)行計(jì)數(shù)。對(duì)所有稀釋度樣品進(jìn)行計(jì)數(shù)，選擇菌 數(shù)在30～300個(gè)的稀釋度樣品進(jìn)行菌落計(jì)算。 3.3在記下各培養(yǎng)皿的菌落數(shù)后，求出該稀釋度下的培養(yǎng)皿平均菌落數(shù)。 3.4菌落數(shù)量按公式（2）、公式（3）計(jì)算

每克干土中甲烷氧化菌數(shù)量=（甲烷氧化菌落平均數(shù)×稀釋倍數(shù)）／干土所占百分比 .·（2 每克干土中丁烷氧化菌數(shù)量=（丁烷氧化菌落平均數(shù)×稀釋倍數(shù)）／干土所占百分比 .（3)

培養(yǎng)皿出現(xiàn)菌落，則表明實(shí)驗(yàn)過程中有污染，本

A.1MOB培養(yǎng)基組成

中華人民共和國(guó) 石油天然氣行業(yè)標(biāo)準(zhǔn) 近地表油氣指示微生物檢測(cè)方法 SY/T 7471—2020 石油工業(yè)出版社出版 （北京安定門外安華里二區(qū)一號(hào)樓） 北京中石油彩色印刷有限責(zé)任公司排版印刷 新華書店北京發(fā)行所發(fā)行 880×1230毫米16開本0.75印張17千字印1—400 2021年1月北京第1版2021年1月北京第1次印刷 書號(hào)：155021·8205定價(jià)：20.00元 版權(quán)專有不得翻印