DB11／T 1930-2021  放射工作人員健康檢查染色體畸變和微核檢測質(zhì)量控制規(guī)范

4.5.1有染色體和微核標(biāo)本片、原始記錄、報告和檔案的存放地點，有專門的電子存儲設(shè)備用于存儲 圖片。 4.5.2 標(biāo)本片存放期限為2年，原始記錄和報告存放期限為6年，圖片等電子文件存放15年。 4.5.3 職業(yè)健康檢查檔案保存時間應(yīng)當(dāng)自放射工作人員最后一次職業(yè)健康檢查結(jié)束之日起不少于15 年。

5實驗室及儀器設(shè)備要求

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5.1.1制片室面積宜大于20m，應(yīng)配備排風(fēng)裝置、水平離心機、負壓移液裝置或真空吸液泵、水浴鍋 等設(shè)備，宜選配細胞自動收獲儀、自動制片機、自動染片機、自動接種儀等。 5.1.2細胞培養(yǎng)間應(yīng)配置生物安全柜或超凈工作臺、恒溫培養(yǎng)箱、冰箱等。 5.1.3顯微閱片室應(yīng)配置光學(xué)顯微鏡及攝像系統(tǒng)，宜選配全自動染色體掃描分析系統(tǒng)施工標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范范本，

.2儀器設(shè)備及技術(shù)指標(biāo)要求

儀器設(shè)備及技術(shù)指標(biāo)符合表1要求！

表1儀器設(shè)備及技術(shù)指標(biāo)要求

6染色體畸變檢測質(zhì)量控制

染色體畸變檢測操作宜參照《放射工作人員職業(yè)健康檢查外周血淋巴細胞染色體畸變檢測與評 價》（GBZ/T248）的規(guī)定。應(yīng)采用培養(yǎng)開始加秋水仙素的方法

6.2樣本的采集、運輸和保存

6.2.1血液采集應(yīng)在所有放射性檢查之前。

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6.2.2血液運輸和保存的最佳溫度為18℃～24℃。樣本采集后應(yīng)盡早接種，當(dāng)日無法接種的樣本保存 時間不宜超過72h。 6.2.3可接種到含植物凝集素培養(yǎng)基后于4℃～20℃保存。 6.2.4每份樣本應(yīng)有唯一編號，編碼規(guī)則由各實驗室制定。

6.3培養(yǎng)基的質(zhì)量控制

6.4培養(yǎng)過程的質(zhì)量控制

血液標(biāo)本應(yīng)在37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h～52h，培養(yǎng)箱內(nèi)應(yīng)放置溫度計進行溫度監(jiān)測。申老 樣本宜接種多份平行樣或適當(dāng)延長培養(yǎng)時間，

6.5染色體制片質(zhì)量控制

6.5.1合格中期細胞的選擇

染色體數(shù)目為46土1；染色體分散良好，長短粗細適中，背景干凈，各條染色體可清楚辨認(rèn)。見

6.5.2出現(xiàn)以下情況的中期細胞不宜作計數(shù)分

a）染色體數(shù)目少于45或多于47條； b) 在同一細胞內(nèi)染色體過于分散，不能在一個油鏡視野內(nèi)觀察到； C 染色體形態(tài)過度細長或過度短粗： d) 染色體呈扭曲狀或緊縮成團 e 染色體分散不良，重疊太多； f) 染色太深不能鑒別染色單體交叉重疊； 9) 同一條染色體的兩條染色單體間距離過大。 5.3 染色體制片每樣本能檢出不少于200個合格中期分裂細胞。

6.6.1染色體畸變的表示符號應(yīng)符合以下要求 a）畸變類型及表示符號應(yīng)符合表2要求：

6.6.1染色體畸變的表示符號應(yīng)符合以下要求：

圖2雙著絲粒體和無著絲粒斷片

圖3著絲粒環(huán)和無著絲粒斷片

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b）若細胞中出現(xiàn)不同數(shù)目的雙著絲粒體、著絲粒環(huán)、三著絲粒體以及無著絲粒體，表示符號應(yīng)符 合表3要求。

色體畸變類型及表示符

表3細胞染色體畸變及表示方法

6.6.2拍攝及原始記錄應(yīng)符合以下要求

a）人工閱片的實驗室需對畸變細胞拍照，并在原始記錄和圖片文件名中標(biāo)明顯微鏡編號、樣本編 號、畸變細胞坐標(biāo)、畸變類型和數(shù)目； b） 有全自動染色體掃描分析系統(tǒng)的實驗室需要在原始記錄上記錄顯微鏡編號、樣本編號、畸變細 胞號、畸變類型和數(shù)目，對畸變細胞標(biāo)注后保存，并需保存所有樣本高倍申期細胞圖片； C）一個細胞的所有染色體應(yīng)在一張圖片內(nèi)，完整展現(xiàn)一個細胞的染色體全貌。 6.6.3 閱片的數(shù)量應(yīng)符合以下要求： a） 對于人工閱片的實驗室，每人每天分析1～4個樣本為宜； b 具備全自動染色體掃描分析系統(tǒng)的實驗室每天閱片數(shù)量不設(shè)限制； ） 在儀器使用記錄上應(yīng)記錄每天閱片數(shù)量并簽字。 6.6.4如全自動染色體掃描分析系統(tǒng)拍攝到雙著絲粒體或者著絲粒環(huán)等畸變，應(yīng)該將此分裂相再次放 到顯微鏡下并調(diào)整微調(diào)旋鈕進行人工鏡檢，仔細辨認(rèn)予以鑒定，并通過核型分析軟件確認(rèn)。如果使用雙

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著絲粒自動掃描分析系統(tǒng)識別雙看絲粒體，仍需經(jīng)人工分析判定，不應(yīng)僅通過軟件識別。 6.6.5如果在分析100個中期分裂細胞中發(fā)現(xiàn)有雙著絲粒體、著絲粒環(huán)、穩(wěn)定性染色體畸變或3個及以 上無著絲粒體，宜另外追加分析100個細胞，并計算此200個細胞的染色體畸變率進行結(jié)果評價，或通知 受檢者復(fù)查。 6.6.6染色體畸變應(yīng)由兩名以上技術(shù)人員復(fù)核確認(rèn)。 6.6.7原始記錄的格式宜參照《放射工作人員職業(yè)健康檢查外周血淋巴細胞染色體畸變檢測與評價》 (GBZ/T248） 5.6.8對本年度拍攝的體檢染色體圖片抽檢，識別準(zhǔn)確率應(yīng)達到90%以上

6.7.1報告的格式宜參照《放射工作人員職業(yè)健康檢查外周血淋巴細胞染色體畸變檢測與評價》（GBZT 248）。 6.7.2檢測結(jié)果異常者應(yīng)附標(biāo)注的畸變圖像。 6.7.3報告采取分析人、復(fù)核人雙人簽字。 6.7.4應(yīng)在體檢結(jié)束之日起25個工作日內(nèi)出具報告。

6.7.1報告的格式宜參照《放射工作人員職業(yè)健康檢查外周血淋巴細胞染色體畸變檢測與評價 248）。 6.7.2檢測結(jié)果異常者應(yīng)附標(biāo)注的畸變圖像。 6.7.3報告采取分析人、復(fù)核人雙人簽字。 6.7.4應(yīng)在體檢結(jié)束之日起25個工作日內(nèi)出具報告。

6.7.1報告的格式宜參照《放射工作人員職業(yè)健康

應(yīng)采用胞質(zhì)分裂阻滯法（CB微核法）進行微核檢測，操作規(guī)程宜參照WS/T187和附錄A

7.2樣本的采集、運輸和保存、培養(yǎng)基的質(zhì)量

7.2.1樣本的采集、運輸和保存應(yīng)符合6.2.1和6.2.2的要求

7.2.1樣本的采集、運輸和保存應(yīng)符合6.2.1和6.2.2的要求。 7.2.2培養(yǎng)基的質(zhì)量控制應(yīng)符合6.3的要求。

7.4微核制片質(zhì)量控制

7.4.1雙核淋巴細胞的判斷應(yīng)符合以下要求：

.4.1雙核淋巴細胞的判斷應(yīng)符合以下要求： a) 雙核淋巴細胞胞漿完整； b) 胞漿和胞核能明確區(qū)分； C) 一個雙核淋巴細胞胞漿與鄰近細胞的胞漿界限清楚； d 位于一個細胞質(zhì)內(nèi)、互相不連接的兩個獨立的核，如果有一個或多個核質(zhì)橋連接，橋不寬于 主核的1/4; e） 兩個核的大小接近，色度深淺相同； f）兩個核不重疊，如果重疊必須能識別各自的邊緣。 4.2 微核制片每樣本能檢出不少于1000個合格雙核淋巴細胞，

7.5.1微核的判斷標(biāo)準(zhǔn)：見示例圖4、

?) 微核直徑為主核直徑的1/16到1/3； b) 微核呈圓形或橢圓形，結(jié)構(gòu)與主核相同； C) 微核與主核不連接，如有重疊或相切，必須能看到各自的邊緣； d 微核染色與主核一致或略淺； e) 微核不折光，與染料顆粒等人工產(chǎn)物相區(qū)別。

圖4正常雙核淋巴細胞

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圖51個細胞含1個微

51 個細胞含1個微核 圖61個細胞

圖61個細胞含3個微核

7.5.2拍攝及原始記錄應(yīng)符合以下要求： a）人工閱片的實驗室需對微核細胞拍照，并在原始記錄上記錄顯微鏡編號、樣本編號、微核細胞 坐標(biāo)； b） 使用微核自動掃描分析系統(tǒng)的實驗室需要在原始記錄上記錄顯微鏡編號、樣本編號、微核細胞 號，并需保存所有樣本雙核淋巴細胞圖片。 7.5.3 閱片的數(shù)量應(yīng)符合以下要求： a 對于人工閱片的實驗室，每人每天分析不宜超過20個樣本； b) 具備微核自動掃描分析系統(tǒng)的實驗室每天閱片數(shù)量不設(shè)限制； C) 在儀器使用記錄上應(yīng)記錄每天閱片數(shù)量并簽字。 7.5.4 使用微核自動掃描分析系統(tǒng)的實驗室需對雙核淋巴細胞和微核圖像人工分析判定，不應(yīng)僅通過 軟件識別。 7.5.5原始記錄的格式宜參照附錄B。

7.6.1報告的格式宜參照附錄C。 7.6.2報告采取分析人、審核人雙人簽字。 7.6.3應(yīng)在體檢結(jié)束之日起25個工作日內(nèi)出具報告。

7.6.1報告的格式宜參照附錄C。

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附錄A （資料性） 人外周血淋巴細胞微核檢測規(guī)程

A.1.2低滲液氯化鉀（KC1）的配制

稱取氯化鉀5.59g，加入去離子水使其充分溶解，定容到1000mL，配成0.075mo1/L氯化鉀溶液 常溫保存?zhèn)溆谩?

A.1.3固定液的配制

取甲醇、冰乙酸，配成體積比3:1的固定液。固定液需在用前新鮮配制

A.2.1外周靜脈血采集

體檢時靜脈血的采集應(yīng)在所有放射性檢查前進行。用肝素抗凝采血管采集受檢者靜脈血約2mL。

A.2.2全血培養(yǎng)步驟

將培養(yǎng)后細胞于離心管以1000r/min～1500r/min（約200g～250g)離心8min～10min后，取出 離心管，用吸管輕輕吸去上清液，每管加入8mL經(jīng)37℃預(yù)溫的0.075moI/LKCl，將細胞團塊輕輕吹打 混勻

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低滲完畢，立即每管加入1mL新配制的固定液，用吸管吹打混勻，以1000r/min～1500r/min(終 200g~250g)離心8min~10min。

A.3.3 第一次固定

取出離心管，用吸管吸去上清液，每管中加入8mL固定液，用吸管快速吹打細胞團塊并充分吹打 混勻，常溫下固定20min~30min，以1000r/min~1500r/min(約200~250g)離心8min~10min。

A.3.4 第二次固定

取出離心管，重復(fù)第一次固定的操作

取出離心管，吸去上清液，根據(jù)細胞團塊的大小每離心管中留3滴～5滴固定液以調(diào)節(jié)細胞濃度 然后將細胞懸液滴到4℃冰箱預(yù)冷的潔凈載玻片上，室溫空氣自然干燥

對每一張微核標(biāo)本片進行編號，并按照編號做

在顯微鏡（400×）下閱片，根據(jù)7.4.1和7.5.1選擇雙核淋巴細胞和微核進行分析。對微核 照，并將坐標(biāo)記到原始記錄上。共分析1000個雙核淋巴細胞，

計算微核率螺栓標(biāo)準(zhǔn)，按本實驗室正常值范圍進行評價

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人外周血淋巴細胞微核檢測原始記錄

（淋巴細胞微核檢測原始記烹

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表B.1外周血淋巴細胞微核檢測記錄表

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安全網(wǎng)標(biāo)準(zhǔn)附錄C （資料性） 人外周血淋巴細胞微核檢測報告

人淋巴細胞微核檢測報告